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速来围观!解读2020年版无菌检查法第二次征求意见稿

时间:2019-03-19 浏览次数:273

2020年版无菌检查法第二次征求意见稿
解析


阅读tips:红色划线部分为删减内容,蓝色部分为增补修订内容。


1、 培养基可按以下处方制备,亦可使用按该处方生产的符合规定的脱水培养基或成品培养基。配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。制备好的培养基应保存在2~25℃、避光的环境,若保存于非密闭容器中,一般在3周内使用;若保存于密闭容器中,一般可在一年内使用若不即时使用,应置于无菌密闭容器中,在 2~25℃避光的环境下保存,并在经验证的保存期内使用。
解读:密闭容器的理解,应该是无菌屏障的概念。针对临用新配的培养基,可使用非密闭容器(如传统的三角锥形瓶);针对不即时使用的培养基,要求使用目前已经慢慢普及的密封瓶(如蓝盖螺旋密封瓶)密闭保存,且有效期需要经过企业自己的验证。对于灭菌F0≥8或者过度灭菌的培养基才有有效期验证的必要,对于115℃灭菌或者煮沸灭菌的培养基还是建议现配现用。

2、0.5%葡萄糖肉汤培养基(用于硫酸链霉素等抗生素的无菌检查)的删除.
解读:这个培养基出现在硫酸链霉素和硫酸卡那霉素的各论中,采用的是直接接种法,且按照该法无法通过药典的适用性检查。故删除。

3、接种黑曲霉的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基上,20~25℃培养5~7天或直到获得丰富的孢子,加入3~5ml含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液,将孢子洗脱
解读:明确黑曲霉培养的zui终目的-获得丰富的孢子,可以理解如果生长良好,培养少于5天或多于7天都是允许的,这也是考虑在实际操作过程中,孢子的生长状态受原始菌株、培养基、培养箱环境等的影响。例如小编在使用不同厂家培养基(进口和国产)培养黑曲霉时,孢子的生长状况是有很大的差别。
 
4、取每管适宜装量为9ml的胰酪大豆胨液体培养基7支,分别接种小于不大于100cfu的枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各2支,另1支不接种作为空白对照,培养不超过5天。逐日观察结果。
解读:在USP40中提到了面积/深度比的概念。在培养基灵敏度检查培养基接种中,取消FTM和TSB每管体积的要求,因为考虑到了目前市售的不同厂家、规格的成品培养基的情况。取消逐日观察,更符合实际操作。
 
5、水溶性供试液过滤前,一般应先将少量的冲洗液过滤,以润湿滤膜。
解析:预先润洗膜可使膜首先达到吸附平衡,减少对供试液的吸附。提前润洗滤膜,不要小瞧这步,有研究表明提前润洗后残留量可以相差3倍。
 
6、供试液经薄膜过滤后,若需要用冲洗液冲洗滤膜,每张滤膜每次冲洗量一般为100ml,总冲洗量一般不超过500ml,zui高不得超过1000ml,以避免滤膜上的微生物受损伤。
解析:去除抑菌性的常用手段,首先选择合适的中和剂,用了适合的中和剂可以提高方法的可重复性,USP40中的总冲洗量不超过500m。不过在《中国药典分析检测技术指南》总冲洗量还是控制在1000ml。

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