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如何选择合适您细胞分选的MACS分选柱

时间:2021-06-29 浏览次数:477

美天旎分选柱(Column)是MACS技术的核心,其特点如下:填充有不同规格的铁珠,可分选或者去除10^7-10^10细胞;表面亲水包被,不损伤细胞,同时保证流速;可以将磁场放大1000-10000倍,因此只需少量的细胞表位被识别即可被磁场捕获,从而为后续实验预留足够抗原表位,如磁珠分选后的细胞无需切除磁珠即可直接染流式抗体,而不受影响。

美天旎的分选柱分几类,如MS、LS、LD、autoMACS column 等,那么,这些有什么区别呢,您在实验中又该如何去选择适合您的分选柱呢?

我们知道,美天旎的MACS分选策略有阳性分选、去除分选,那我们就按两种分选策略来分析如何选择恰当的分选柱:

 
阳性分选
1、根据要分选的细胞数量选择分选柱:
MS柱容纳的细胞上样量是2×10^8细胞(既包含阳性细胞又包含阴性细胞),而其能捕获的阳性细胞是10^7。
LS分选柱细胞上样量是2×10^9细胞(既包含阳性细胞又包含阴性细胞),而其能捕获的阳性细胞
是10^8。

2、目的细胞是常见细胞还是稀有细胞
为了在分选稀有细胞(表达率<5%)时得到较更高的纯度,您可以使用两个分选柱:用一根分选柱进行一次分选后,阳性成份再过一次新的分选柱。
在阳性分选中,过两次分选柱可以获得更高纯度的细胞。


3、大体积的细胞
另外,如果您要分选的目的细胞是体积较大的特殊细胞,如原生动物细胞、人皮肤郎罕式细胞、鼻咽癌细胞、心肌细胞等,那推荐您使用Large cell columns。因为大细胞柱的铁珠间隙足够大,容许这些特殊的大体积细胞顺利通过。
 
 
去除分选
去除分选中需要考虑以下几个因素:
1 您使用MACS isolation kits 或MACS microbeads吗?
2 抗原表达强还是弱呢?
3 您需要更高的纯度还是回收率呢?
4 您需要分选多少细胞?
根据这几个因素,您可以选择合适的去除分选柱。
注意:某些MACS Cell Isolation Kits先进性去除分选(第一步分选),然后进行阳性分选(第二步分选)。请使用说明书中推荐的分选柱。

三、分选柱对应搭配的分选器(磁力架)的推荐

1、MS分选柱和Large Cell Columns,适配的分选器为单通道的miniMACS或者8通道的OctoMACS。
 
2、LS和LD分选柱或 Whole Blood Columns,适配的分选器为单通道的midiMACS或者4通道的QuadroMACS。
 
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