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常用的免疫组织化学染色方法(上)

时间:2021-08-13 浏览次数:470

常用的免疫组化染色方法很多,有直接法和间接法。直接法是将酶或荧光素等标记在第一抗体上,然后用该被标记的第一抗体与组织细胞中的抗原结合,即可以显色或在荧光显微镜下观察结果;

 

间接法是将标记物标记在第二抗体或第三抗体(复合物)上,其方法是先将特异性的第一抗体与组织细胞中相应的抗原结合,再将被标记上标记物的第二抗体与第一抗体结合,最后用显色剂显色或在荧光显微镜下观察结果。

 

如果标记物是标记在第三抗体(复合物)上,则第二抗体与第一抗体结合后,再用被标记上标记物的第三抗体(复合物)与第二抗体结合,最后用显色剂显色或在荧光显微镜下观察结果。

 


01  ABC 法  

卵白素-生物素复合物(avidin biotin complex,ABC)法属于亲和免疫组织化学技术,该方法是根据卵白素和生物素具有高度亲和力的生物学特性,用生物素与过氧化物酶结合获得生物素化过氧化物酶,生物素化过氧化物酶再和加入的卵白素形成卵白素-生物素-过氧化物酶复合物即ABC复合物。

 

ABC法为三步法,第二抗体为生物素化的IgG,其中的Fab片段和第一抗体结合,生物素和ABC复合物中的卵白素结合,最后通过ABC复合物上的过氧化物酶参与显色反应而形成有颜色的不溶性沉淀物。由于卵白素和生物素的亲和力极强,所以ABC法较敏感,比PAP法敏感20~40倍。

   

02  LSAB(S-P) 法 

标记抗生物素蛋白链菌素-生物素(lablled streptavidinbiotin)法和ABC法相似,不同处是在第二抗体之后ABC法用ABC复合物而LSAB法用标记了过氧化物酶的抗生物素蛋白链菌素(streptavidin,SA)。SA是从链霉菌属蛋白分离出来的一种蛋白质,它仅标记了过氧化物酶而本身没有与生物素连接,生物素是连接在第二抗体上。

 

由于SA分子量较小,ABC复合物分子量大,因而SA穿透组织的能力比ABC复合物大,反应速度快。SA有两个和生物素亲和力极高的结合点,其本身没有连结生物素,可以与第二抗体上的生物素连结。这样,SA比ABC复合物更容易与第二抗体上的生物素结合,因而SA的敏感性比ABC高,反应所需的时间比ABC短。

如在实验中遇到困难,也可以选择Leica全自动免疫组化染色仪来协助您。

  


下期预告

酶标聚合物(labelled dextran polymer,LDP)法

增强聚合物一步(enhanced polymer one setp,EPOS)法

催化信号放大(catlyzed signal amplification,CSA)法

抗生物素蛋白链菌素-生物素复合物(streptavidin biotincomplex,SABC)法


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