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常用的免疫组织化学染色方法(下)

时间:2021-08-24 浏览次数:111

常用的免疫组化染色方法很多,有直接法和间接法。直接法是将酶或荧光素等标记在第一抗体上,然后用该被标记的第一抗体与组织细胞中的抗原结合,即可以显色或在荧光显微镜下观察结果;


间接法是将标记物标记在第二抗体或第三抗体(复合物)上,其方法是先将特异性的第一抗体与组织细胞中相应的抗原结合,再将被标记上标记物的第二抗体与第一抗体结合,最后用显色剂显色或在荧光显微镜下观察结果。如果标记物是标记在第三抗体(复合物)上,则第二抗体与第一抗体结合后,再用被标记上标记物的第三抗体(复合物)与第二抗体结合,最后用显色剂显色或在荧光显微镜下观察结果。


常用的EPOS一步法属于直接法,EnVision二步法、PAP/APPAP法、LSAB(S-P)法、SABC法、和CSA法等属于间接法。相对来说直接法特异性高,敏感性低,而间接法则敏感性高,特异性低。


05
SABC 法



抗生物素蛋白链菌素-生物素复合物(streptavidin biotincomplex,SABC)法方法和ABC法相类似,不同之处是SABC法用抗生物素蛋白链菌素代替了ABC法ABC复合物中的卵白素获得SABC复合物。由于抗生物素蛋白链菌素与生物素的亲和力更高,而且SABC复合物不需在使用前配制,所以SABC法比ABC法更加敏感和简单。




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06
LDP 法


酶标聚合物法(labelled dextran polymer,LDP)法应用了酶标聚合物技术,如EnVision检测系统,首先将辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶标记在葡聚糖聚合物上,然后再与第二抗体连接而形成EnVision二抗。


LDP法属于二步法,特异性一抗和组织细胞抗原结合后,再用EnVision二抗与抗原抗体复合物中的一抗结合,最后通过EnVision二抗上的酶参与显色反应。


由于EnVision二抗中的聚合物结构的独特,可以连接更多的二抗,使每个多聚物有超过20个位点与第一抗体结合,聚合物上能标记上的酶数量较多。因此在显色时有充足的酶与显色剂起反应。


因此LDP法的敏感性高于ABC、LSAB等方法。此外,LDP法中的第二抗体没有生物素的存在,不会出现ABC、LSAB等方法中含有的生物素与组织中内源性生物素起交叉反应的现象,因此LDP法的非特异性背景染色极低。




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07
EPOS 法


增强聚合物一步法(enhanced polymer one setp,EPOS)法也属于酶标聚合物法,和LDP法一样,是利用酶标聚合物技术,将辣根过氧化物酶标记在葡聚糖聚合物上,然后再与第一抗体连接而形成EPOS一抗。


EPOS法属于直接法,直接用EPOS一抗特异性和组织细胞抗原结合后,一抗上的酶参与显色反应。由于EPOS一抗中的聚合物上能标记上的酶数量较多,在显色时有充足的酶与显色剂起反应。因此EPOS法虽然是直接法,但具有高敏感性。


此外,EPOS一抗没有生物素的存在,不会出现ABC、LSAB等方法中含有的生物素与组织中内源性生物素起交叉反应的现象,背景清晰。但EPOS一抗种类较少,难以普及。



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08
CSA 法


催化信号放大(catlyzed signal amplificationCSA)法是应用一种放大试剂生物素化酪胺,与抗生物素蛋白链菌素-生物素-过氧化物酶复合物(streptavidin biotin-HRP)连接,在过氧化物酶作用下形成大量的生物素沉积物,再加入抗生物素蛋白链菌素-过氧化物酶复合物后,过氧化物酶与生物素沉积物形成大量的过氧化物酶聚合,聚合的过氧化物酶与显色剂起反应。在第三步应用了SABC法的SABC-HRP复合物,第五步应用了LSAB法的SA-HRP复合物。


由于CSA法加入了催化信号放大试剂,使信号不断放大,因此敏感性比EPOS一步法、EnVision二步法、PAP/APPAP法、LSAB(S-P)法和SABC等方法高。特别适用于检测较弱的组织抗原。



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以上就是后四种常用的免疫组织化学染色方法的简介。如在实验中遇到困难,也可以选择Leica全自动免疫组化染色仪来协助您。



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