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细说肿瘤解离试剂盒的样品收集、处理及保存方法

时间:2022-07-22 浏览次数:1116

  肿瘤解离试剂盒已被开发用于从人肿瘤组织中温和、快速地产生单细胞悬液。 该试剂盒用于产生大量肿瘤细胞和肿瘤浸润淋巴细胞,同时保留重要的细胞表面表位。该试剂盒与gentleMACS Dissociators结合,非常适合用于节省时间和可重复的制备单细胞悬液。
 
  肿瘤解离试剂盒试剂准备:
  1、使用前将所有的试剂和标本缓慢均衡至室温(18-25℃),试剂不能直接在37℃溶解。
  2、标准品(冻干品):每瓶标准品加入标准品稀释液1mL,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为2000pg/mL。准备7个稀释标准品的EP管,每个EP管中加入150μL的标准品稀释液,如图所示依次倍比稀释成不同的梯度, 标准品稀释液(0pg/mL)直接作为空白孔。为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。
  3、浓洗涤液:用580mL蒸馏水或去离子水将20mL浓洗涤液稀释至600mL,进行30倍稀释。
 
  肿瘤解离试剂盒的样品收集、处理及保存方法:
  1、血清:操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离;
  2、血浆:EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒;
  3、细胞上清液:1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物;
  4、组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液;
  5、保存:如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70 ℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
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